小膜泡 大用途

外泌体（Exosome），是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜结构，直径大约40-100 nm，外泌体中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。

外泌体最早于1983年在绵羊网织红细胞中被发现，当时认为外泌体只是红细胞的“废弃物”；1987年Johnstone将其命名为“Exosome”；直至2013年，James E. Rothman, Randy W. Schekman和Thomas C. Südhof 3位科学家因揭秘外泌体等细胞内囊泡的运输调控机制问鼎诺奖，此后，外泌体的研究逐渐火热，原本被认定为运输细胞废物的外泌体成为了学术界的宠儿。

外泌体主要有三大应用方向，分别是治疗、诊断和用药载体。目前研究最多的是诊断领域，可以成为多种疾病的早期诊断标志物。例如，肿瘤细胞释放大量外泌体，这些外泌体与肿瘤的发生、发展、转移以及抗药性具有一定的相关性。因此，可以利用肿瘤细胞释放到血液中的外泌体，检测其中特异的蛋白和非编码RNA等，来分析肿瘤相关的信息。

外泌体的提取与分离

图1. 外泌体的研究思路

分离提取是外泌体研究的第一步，也是至关重要的一步。获得高纯度、有活性的外泌体，才能在下游实验和分析中得到更精准的数据。目前常用的外泌体提取方法包括超速离心、免疫亲和、超滤、流式细胞术、微流控等，这些方法在回收效率，纯度、功能活性、可操作性、成本等方面的表现也各有优劣。 

图2.  外泌体提取方法图示[1]。A. 含有悬浮的外泌体和蛋白质的起始样品；B. 密度梯度离心；C. 超滤；D. SEC；E. AF4；F. 沉淀分离法；G. 免疫亲和

基于磁珠的外泌体分离方法
利用超速离心和沉淀等方法，都难以富集外泌体的亚型，而免疫亲和捕获可以通过抗原与抗体之间的相互作用，利用特异性抗体包被磁珠，分离出高纯度和特定的外泌体亚型。外泌体表面有多种蛋白质，其中CD9、CD63 和 CD81 是最常见的标志物，几乎在所有外泌体上都有表达 [2]；其它蛋白可用于分离源自特定细胞类型的外泌体，例如，硫酸软骨素肽聚糖 4 抗体包被的磁珠已被用于捕获黑色素瘤细胞衍生的外泌体 [3]，而包被CD56 或 CD171 抗体的磁珠已被用于捕获神经元细胞衍生的外泌体 [4、5]。

图3：基于磁珠的外泌体分离方法示意图[6]。通过外泌体的表位抗原与生物素标记抗体、链霉亲和素磁珠之间的相互作用，外泌体和磁珠结合在一起。

此外，研究人员利用外泌体结合分子Tim4蛋白与磷脂酰丝氨酸的Ca²⁺依赖性结合，开发出可用于分离细胞外囊泡和外泌体的免疫亲和捕获方法[7]。固定在磁珠上的Tim4 蛋白分子与外泌体表面的磷脂酰丝氨酸分子之间的特异性相互作用，可以有效地将外泌体从样品中分离出来。随后，通过添加络合剂去除Ca²⁺，可以方便地从磁珠中释放捕获的外泌体。根据文献中的实验数据，使用该方法从细胞培养基和生物流体样品中成功分离的外泌体，在质量和纯度上具有显著优势。

为度生物助力外泌体研究
外泌体提取磁珠：



供货信息：



为度生物3μm SA修饰磁性微球正在免费试用中，点击“免费试用”即可领取样品

外泌体抗体：



参考文献：

[1] Monguió-Tortajada M, Gálvez-Montón C, Bayes-Genis A, et al. Extracellular vesicle isolation methods: rising impact of size-exclusion chromatography[J]. Cellular and Molecular Life Sciences, 2019, 76(12): 2369-2382.

[2] Clayton A, et al. Analysis of antigen presenting cell derived exosomes, based on immune magnetic isolation and flow cytometry. J Immunol Methods 2001;247:163–74. 

[3] Sharma P, et al. Immunoaffinity-based isolation of melanoma cell-derived exosomes from plasma of patients with melanoma. J Extracell Vesicles 2018;7:1435138. 

[4] Lugini L, et al. Immune surveillance properties of human NK cell-derived exosomes. J Immunol 2012;189:2833–42. 

[5] Mustapic M, et al. Plasma extracellular vesicles enriched for neuronal origin: a potential window into brain pathologic processes. Front Neurosci 2017;11(278). 

[6] Zhang M, Jin K, Gao L, et al. Methods and technologies for exosome isolation and characterization[J]. Small Methods, 2018, 2(9): 1800021.

[7] Nakai W, Yoshida T, Diez D, et al. A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles[J]. Scientific reports, 2016, 6(1): 1-11.

联系我们
联系电话：0512-80905220
客服邮箱：vdo@vdobiotech.com
客服QQ：3004645756
地址：苏州市工业园区星湖街218号生物医药产业园C18栋