基于疏水性羧基微球的高敏免疫检测新方案

在免疫诊断试剂的核心原料开发中，磁珠的选择与偶联方案的优化，是构建优异检测性能——如高灵敏度、高特异性与良好稳定性的关键。然而，传统磁珠与常规偶联方法在面对结构复杂的抗体或分子量小、活性位点少的抗原时，常面临偶联效率不均一、结合物稳定性不足等挑战。

为突破这一技术瓶颈，为度生物正式推出全新开发的 2.6 μm 疏水性羧基磁珠及配套的微球偶联方案。该产品可有效提升部分免疫检测项目的灵敏度，为下游客户的试剂开发提供更可靠、高效的磁珠原料支持。

 

 

PART.01  产品核心特点

本款2.6 μm疏水性羧基磁珠，凭借其表面特性，可与蛋白质的疏水结构域产生强效相互作用，从而实现对目标蛋白的高效吸附。^{【1】【2】}该机制能将蛋白质预先富集于磁珠表面，有助于在后续共价偶联中形成更为稳定、均一的蛋白-磁珠复合物。经过多项目验证，该磁珠可作为通用固相载体，在多种免疫检测体系中适用，特别是在抗原包被项目（间接法）有比较好的效果，为各类检测项目的开发提供灵活、可靠的解决方案。

几种常见的免疫检测体系（直接法、间接法、竞争法及夹心法）^【3】

 

 

PART.02  偶联推荐方案

为确保该磁珠在检测项目中发挥最佳性能，我们同步开发了一套抗原偶联磁珠的标记工艺，提升试剂的长期储存稳定性与检测灵敏度。

缓冲液与试剂配制

1. 活化/偶联缓冲液：0.1 M MES，pH 5.0。

2. 活化剂：用活化缓冲液配制EDC (10 mg/mL) 和 Sulfo-NHS (10 mg/mL)，现用现配。

3. 封闭液：0.01 M PBS，1% BSA ， 0.25% C₂H₇NO， 0.1% PC-300，pH 7.4。

4. 清洗液/保存液：Tris 6.6 g/L, BSA 0.5 g/L, T-20 0.5 mL/L, PC300 0.5 mL/L, BND10 0.5 mL/L, pH 7.4。

 

磁珠偶联流程（以10 mg磁珠为例）

1. 准备：将试剂平衡至室温。按比例计算用量（NHS: 25 μg/mg磁珠；EDC: 40 μg/mg磁珠；抗原: 2 μg/mg磁珠，可根据不同项目情况调节抗原用量）。

2. 磁珠清洗：取10 mg磁珠，用磁力架分离弃上清，加入1 mL活化缓冲液重悬清洗，重复此步骤共3次。

3. 活化：将清洗后的磁珠重悬于1 mL活化缓冲液中。依次加入25 μL NHS溶液和40 μL EDC溶液，混匀后，于25℃下垂直混合活化30分钟。

4. 清洗：活化结束后，磁分离弃上清，用1 mL偶联缓冲液清洗磁珠1次。

5. 偶联：将磁珠重悬于1 mL偶联缓冲液中，加入20 μg抗原，于37℃下垂直混合反应3小时。

6. 封闭：偶联结束后，磁分离弃上清，加入1 mL封闭液，于37℃下封闭2小时。

7. 最终清洗：封闭结束后，磁分离弃上清，用1 mL清洗液清洗磁珠，重复3次。

8. 保存：用保存缓冲液将磁珠重悬，浓度调整为10 mg/mL，标注批号与浓度，于2-8℃保存。

 

PART.03 应用案例验证：

甲状腺球蛋白抗体（Anti-TG）

Anti-TG是自身免疫性甲状腺病中的重要标志物。利用本款疏水磁珠及上述工艺进行TG抗原的偶联，使用间接法的方案，在吖啶酯磁微粒化学发光平台（AE）进行验证。使用为度整体解决方案制备的检测试剂，表现出与进口试剂一致的灵敏度和稳定性，充分验证了该产品在复杂临床标志物检测中的可靠性能。

 

基础性能

使用为度疏水羧基磁珠（CMP1003CE）标记TG抗原配制成检测试剂，测试此试剂基础性能。结果显示，此试剂检测时间、线性范围、检测限及CV与对照试剂（罗氏）达到相当的水平。

 

临床样本相关性

 

使用为度疏水羧基磁珠（CMP1003CE）标记TG抗原配制试剂测试临床样本与罗氏试剂相关性，R²=0.99，证明两种试剂相关性良好。

 

磁珠标记抗原稳定性

检测使用为度疏水羧基磁珠（CMP1003CE）标记TG抗原配制试剂稳定性，结果显示试剂在37℃加速7天后，信号值保留率在85%以上，试剂稳定性良好。

 

PART.04   产品信息

 

 

参考文献

1. Greg T. Hermanson, Bioconjugate Chemistry 2nd Edition

2. Butler, John E. "Solid supports in enzyme-linked immunosorbent assay and other solid-phase immunoassays." Methods 22.1 (2000): 4-23.

3. Japp, Nicole C., et al. "Tumor Biomarker In‐Solution Quantification, Standard Production, and Multiplex Detection." Journal of Immunology Research 2021.1 (2021): 9942605.