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苏州为度生物技术有限公司
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公司新闻/正文
His标签蛋白纯化高效解决方案——琼脂糖磁性微球
1444 人阅读发布时间：2025-02-17 09:41
亲和层析是一种常用的纯化方式，通过构建重组蛋白、融合亲和标签的方法可以有效地确保不同的目的蛋白通过相同的亲和标签使用相同的层析介质进行纯化。Ni-NTA/TED琼脂糖磁珠是一种用于纯化带有组氨酸（His）标签蛋白的新工具，通过利用组氨酸残基侧链与Ni离子的强烈作用，可以在一步纯化中得到较高纯度的His标签蛋白样品。
Ni磁珠内核具有超顺磁性，在外加磁场的作用下可实现快速的分离与回收，与传统的柱层析方法相比，Ni磁珠纯化对样本的前处理要求较低，无需经过反复的离心和过滤即可直接孵育。不仅简化了操作流程，还更容易实现高通量和自动化处理。因此，Ni磁珠已广泛应用于分子生物学、蛋白质研究以及生物制药等领域，为相关研究提供了高效便捷的解决方案。
图1. 为度生物琼脂糖磁性微球光镜图
His 标签蛋白的纯化机制
Ni2+有6个空电子轨道来形成配位键，Ni-NTA/TED琼脂糖磁珠上的螯合剂分别占用4和5个配位键，剩余的配位键用于捕获His标签蛋白，本产品使用的螯合剂及其相互作用方式如图所示：
图2. His标签蛋白与固定金属离子相互作用的主要机制[1]
Ni-NTA/TED琼脂糖磁珠产品特点
非特异性低，蛋白纯度高：采用高亲水琼脂糖材料以及亲水性修饰的磁核混合成球，非特异性吸附较低，纯化后的蛋白纯度可达到90%以上，适用于多种下游应用。
高结合载量：采用分子量为22kd的His标签蛋白，测试Ni-NTA的结合载量≈60mg/mL沉降胶；Ni-TED的结合载量≈30mg/mL沉降胶。
样本前处理简化：无需经过反复离心和过滤等样本前处理环节，磁珠可与粗提液直接孵育。
支持高通量与自动化：搭配仪器，可以实现小规模His标签蛋白纯化及高通量自动化纯化。
应用案例
Ni-NTA琼脂糖磁性微球纯化案例
01 标准品载量和收率测试
将含有His标签蛋白（分子量22kd）的蛋白纯品分别与为度Ni-NTA琼脂糖磁性微球和T公司Ni-NTA琼脂糖磁珠进行孵育，并按照说明书流程进行清洗和洗脱。
测定蛋白浓度后计算结合载量及回收率，结果如下表所示，为度Ni-NTA琼脂糖磁性微球和T公司Ni-NTA琼脂糖磁珠结合载量分别为55.6和36.8mg/mL沉降胶，VDO高于进口竞品产品。两步洗脱综合回收率分别为92.4%和96.1%，与进口产品基本一致。
02 大肠杆菌样本纯化
将含有His标签蛋白（分子量26kd）的大肠杆菌粗提液分别与为度Ni-NTA琼脂糖磁性微球和T公司Ni-NTA琼脂糖磁珠进行孵育，并按照说明书流程进行清洗和洗脱。
SDS-PAGE结果如下图所示，从洗脱液中可以得到纯度较高的His标签蛋白，纯度均＞90%，VDO收集8.87mg，T公司收集6.77mg。
Ni-TED琼脂糖磁性微球纯化案例
01 标准品蛋白载量和收率测试
将含有His标签蛋白（分子量22kd）的蛋白纯品与为度Ni-TED琼脂糖磁性微球进行孵育，并按照说明书流程进行纯化。最终使用Nanodrop测试洗脱液浓度，计算结合载量及回收率。
结果如下图所示，为度Ni-TED琼脂糖磁珠结合载量为29.2mg/mL沉降胶，回收率为88.5%。
02 大肠杆菌样本纯化
将含有His标签蛋白（分子量26kd）的大肠杆菌粗提液与为度Ni-TED琼脂糖磁性微球进行孵育，并按照说明书流程进行清洗和洗脱。
SDS-PAGE结果如下图所示，从洗脱液中可以得到纯度较高的His标签蛋白，纯度＞90%，收集蛋白2.82mg。
为度Ni-NTA/TED琼脂糖磁珠产品信息
参考文献
1. Burgess, Richard R., and Murray P. Deutscher, eds. Guide to protein purification. Academic Press, 2009.