干货分享 | 为度化学发光偶联工艺助力下游试剂开发

在化学发光检测系统中，磁珠与抗体的偶联工艺开发是试剂开发过程中最重要的步骤之一。选择一种合适的偶联方式，可以保证抗体连接磁珠上后仍保持较高的活性，这对于降低非特异性吸附，提升试剂灵敏度具有重要作用。

我们对磁珠偶联抗体过程中的EDC/NHS用量、偶联缓冲液组分、封闭剂类型以及偶联温度、时间和混匀强度等关键参数进行系统的评估和验证，最终优化出一套完整的适合为度化学发光羧基磁珠的抗体偶联工艺流程。在此基础上，我们交叉对比了为度推荐工艺与进口厂家推荐工艺分别在两种磁珠上的适配性，给下游试剂开发中磁珠的使用提供参考。

1.清洗：将所需原料和试剂取出，平衡至室温；取磁性微球（固含 2.5%）400μL 加入 EP 管中，磁分离去上清；加入 2mL 活化缓冲液（pH4.0 MES），涡旋混匀 10s，磁分离去上清，重复该步骤2 次；

2.活化：清洗后，加入 900μL 活化缓冲液，涡旋混匀 10s，分别各加入 50μL 的活化液 EDC 和 NHS，涡旋混匀 10s，置于恒温震荡器 37℃活化 0.5hr；

3.清洗：活化结束后，磁分离去上清；加入 2mL 偶联缓冲液（pH7.0 PBS），涡旋混匀 10s，磁分离去上清，重复该步骤2 次；

4.偶联：加入适当偶联缓冲液混匀后，再加入 200μg 的偶联抗体，使磁珠偶联浓度为 10mg/mL，涡旋混匀 10s，置于恒温震荡器 37℃反应 2hr；

5.封闭：偶联结束后，磁分离去上清；加入 2mL 封闭剂（C₂H₇NO、BSA），涡旋混匀 10s，于恒温震荡器 37℃封闭 0.5hr；

6.清洗：封闭结束后，磁分离去上清；加入 2mL 磁性微球保存液，涡旋混匀 10s，磁分离去上清，重复该步骤 3 次；

7.保存：添加保存缓冲液（pH7.4 Tris-HCl、BSA、T-20、防腐剂）使磁珠浓度为10mg/ml，置于2-8℃保存。

关于为度化学发光偶联工艺更多的验证数据，可以查看之前推送的文章《干货分享 | 化学发光磁性微球偶联方案》。


为了更直观和客观的反应不同偶联工艺对不同磁珠的适配性，我们使用为度3μm链霉亲和素磁珠作为对照磁珠（货号：CMP1003SA，批号：2221609A），测试在使用不同偶联工艺条件下，为度3μm羧基磁珠（货号：CMP1003CA，批号：2217803A）和进口厂家的3μm羧基磁珠在IL-6与CEA项目中的表现。

1)使用为度偶联工艺测试磁珠反应性


表1. 使用为度推荐的偶联工艺标记抗体，检测IL-6与CEA抗原的信号值比较

2)使用进口厂家偶联工艺测试磁珠反应性


表2. 使用进口厂家推荐的偶联工艺标记抗体，检测IL-6与CEA抗原的信号值比较

3)不同偶联工艺及不同磁珠的信号值对比


图1. 不同厂家的磁珠在IL-6与CEA的信号值比较


 

1)使用为度推荐的偶联工艺标记抗体并测试磁珠反应性，可得知：为度磁珠在IL-6和CEA项目中的信号值分别为对照磁珠的126%和101%；进口磁珠在IL-6和CEA项目中的信号值分别为对照磁珠的39%和51%。

2)使用进口磁珠厂家的偶联工艺标记抗体并测试磁珠反应性，可得知：为度磁珠在IL-6和CEA项目中的信号值分别为对照磁珠的86%和104%；进口磁珠在IL-6和CEA项目中的信号值分别为对照磁珠的127%和155%。

以上数据可以证明不同的标记工艺会影响磁珠的反应性，这是因为不同厂家磁珠的工艺和所用的原材料是有所区别的，因此不同厂家推荐的标记工艺也有一定差别。在标记为度磁珠时，建议使用为度标记工艺会取得更好的效果。



 

为度生物化学发光磁性微球具有超顺磁性且磁含量适中，具有优异的重悬性以及较快的磁响应速度；该系列产品采用先进的微球合成技术和独特的表面处理工艺，可修饰多种功能基团，为广大客户开发不同的技术路线提供丰富的选择。高载量的功能基团保障了产品的结合能力，在免疫领域表现优异。