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苏州为度生物技术有限公司
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公司新闻/正文
一文读懂 IVD 新晋顶流——化学发光免疫检测
4623 人阅读发布时间：2022-07-12 09:50
1. 化学发光免疫分析技术介绍
化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay）是利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性，以标记发光剂为示踪物而建立起来的免疫分析方法，是在酶免疫分析、放射性免疫分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项新的免疫测定技术。化学发光免疫分析技术能够用来检测不同生物标志物，包括半抗原、激素、抗原、抗体、脂肪酸、酶、微生物等。相比于传统的免疫分析技术，化学发光反应具有无需外部光源、背景信号低以及信噪比高的特点，因此化学发光分析法具有灵敏度高、检测限低、检测范围宽、分析时间短和易于实现自动化等优势，是目前精确度最高的临床免疫检验手段之一。
2. 化学发光免疫分析中的标记物
在化学发光免疫技术中，我们常采用化学发光试剂或化学发光功能化材料作为标记物，解决了传统的放射性同位素标记带来的对机体的损害和荧光标记带来的高背景问题。通常来说，标记物要符合以下条件：
3. 三种主要的化学发光免疫分析方法
根据反应过程中使用的标记物不同，可将化学发光免疫检测技术分为标记有发光物质的直接化学发光免疫检测技术、酶标记的酶促化学发光免疫检测技术以及电化学发光免疫检测技术。三种化学发光免疫分析技术对比：
4. 化学发光免疫分析中的三种主要免疫反应模式
在化学发光免疫分析中，为了实现定量分析，需要对抗体和抗原之间的免疫反应进行量化测定。目前主要有三种策略，即竞争法、夹心法和间接法，一般依据待检物的不同选择合适的反应模式，进而实现对待检物的高灵敏度检测。
● 竞争法：竞争法是基于非标记抗原和标记抗原与抗体竞争性结合的反应。另外，此方法也可以对抗体进行标记，利用标记和非标记抗体共同竞争与抗原的反应来实现检测。结合到固相载体上的标记抗原（或抗体）越多，发光强度越强。由于加入的标记物抗体浓度是固定的，当样品中抗原含量越高，能够竞争结合到固相载体上的标记抗原越少，最终检测出的发光与样品中待测抗原含量成反比关系。由于激素等一些小分子化合物缺乏抗体结合位点，因此选择竞争法来进行测定。
● 夹心法：夹心法是将包被抗体、抗原和标记抗体结合在一起，形成夹心式结合物。该法主要用于测定大分子抗原。样品中待测抗原含量越高，形成的夹心复合物越多，最终检测的发光强度与样品中待测抗原含量成正相关。（除双抗体夹心法之外，还可将抗原标记在固相载体上，与待测抗体和标记抗原形成夹心结构，用于检测抗体。）
● 间接法： 间接法是在固相载体上包被可与待测物（抗体）发生免疫反应的抗原，待测样本中的待测物与抗原发生免疫反应，再加入标记的抗-抗体，形成免疫复合物。最终检测的发光强度与样本中待测抗体的含量成正相关。
5. 化学发光免疫反应试剂核心原料之一—磁珠
化学发光免疫分析反应是将化学发光反应与基于磁珠的免疫分析相结合的一种方式，磁珠作为抗体的固相载体，是化学发光试剂中的一个重要的原材料。磁珠可以通过偶联抗体而特异性的结合目标物质，又因其本身具有超顺磁性，因此在外加磁场的作用下，最终达到分离目标产物的作用，简化清洗流程。因此，磁珠的选择对化学发光免疫反应的灵敏度、特异性以及最终的检测结果等具有重要的影响。
为度生物化学发光磁珠具有超顺磁性且磁含量适中，具有优异的重悬性以及较快的磁响应速度；该系列产品采用先进的微球合成技术和独特的表面处理工艺，可修饰多种功能基团，为广大客户开发不同的技术路线提供丰富的选择。高载量的功能基团保障了产品的结合能力，在免疫领域表现优异。
化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay）是利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性，以标记发光剂为示踪物而建立起来的免疫分析方法，是在酶免疫分析、放射性免疫分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项新的免疫测定技术。化学发光免疫分析技术能够用来检测不同生物标志物，包括半抗原、激素、抗原、抗体、脂肪酸、酶、微生物等。相比于传统的免疫分析技术，化学发光反应具有无需外部光源、背景信号低以及信噪比高的特点，因此化学发光分析法具有灵敏度高、检测限低、检测范围宽、分析时间短和易于实现自动化等优势，是目前精确度最高的临床免疫检验手段之一。
2. 化学发光免疫分析中的标记物
在化学发光免疫技术中，我们常采用化学发光试剂或化学发光功能化材料作为标记物，解决了传统的放射性同位素标记带来的对机体的损害和荧光标记带来的高背景问题。通常来说，标记物要符合以下条件：
1) 与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物；
2) 偶联后能保持发光试剂高的量子产率；
3) 保证被标记物的理化特性，尤其不改变其免疫活性。
在化学发光免疫技术中有化学发光试剂、酶这两类标记物：
1) 化学发光试剂：
a) 鲁米诺及其衍生物：用于直接化学发光免疫分析，使用过氧化物酶催化鲁米诺可以增强发光强度和发光稳定性，简化了分析步骤和信号处理；
b) 吖啶酯：用于直接化学发光免疫分析，吖啶酯在碱性条件下能在短时间内产生激发光，因此效率高、稳定性好，而且发光体系结构简单、使用成本低，并且在本底较低的条件下即可快速完成定量检测；
c) 三联吡啶钌标记：用于电化学发光免疫分析，联吡啶钌水溶性好、化学性能稳定、在电化学氧化条件下发光效率高且具有可逆的电子转移特性，因此得到广泛应用。
2) 酶标记物：
a) 碱性磷酸酶（AP）：用于酶促化学发光免疫分析，AP 具有活性高、分子量小、稳定性好，易分离提纯等优点。它可与 1，2-二氧环 C2 H6 构成发光体系，是目前最灵敏的一类化学发光体系；
b) 辣根过氧化物酶（HRP）：用于酶促化学发光免疫分析，HRP 具有较好的稳定性，较高的活性，较强的特异性，易于分离提纯且价格低廉，是化学发光酶免疫分析中应用最广的一种酶。
3. 三种主要的化学发光免疫分析方法
根据反应过程中使用的标记物不同，可将化学发光免疫检测技术分为标记有发光物质的直接化学发光免疫检测技术、酶标记的酶促化学发光免疫检测技术以及电化学发光免疫检测技术。三种化学发光免疫分析技术对比：
4. 化学发光免疫分析中的三种主要免疫反应模式
在化学发光免疫分析中，为了实现定量分析，需要对抗体和抗原之间的免疫反应进行量化测定。目前主要有三种策略，即竞争法、夹心法和间接法，一般依据待检物的不同选择合适的反应模式，进而实现对待检物的高灵敏度检测。
● 竞争法：竞争法是基于非标记抗原和标记抗原与抗体竞争性结合的反应。另外，此方法也可以对抗体进行标记，利用标记和非标记抗体共同竞争与抗原的反应来实现检测。结合到固相载体上的标记抗原（或抗体）越多，发光强度越强。由于加入的标记物抗体浓度是固定的，当样品中抗原含量越高，能够竞争结合到固相载体上的标记抗原越少，最终检测出的发光与样品中待测抗原含量成反比关系。由于激素等一些小分子化合物缺乏抗体结合位点，因此选择竞争法来进行测定。
● 夹心法：夹心法是将包被抗体、抗原和标记抗体结合在一起，形成夹心式结合物。该法主要用于测定大分子抗原。样品中待测抗原含量越高，形成的夹心复合物越多，最终检测的发光强度与样品中待测抗原含量成正相关。（除双抗体夹心法之外，还可将抗原标记在固相载体上，与待测抗体和标记抗原形成夹心结构，用于检测抗体。）
● 间接法： 间接法是在固相载体上包被可与待测物（抗体）发生免疫反应的抗原，待测样本中的待测物与抗原发生免疫反应，再加入标记的抗-抗体，形成免疫复合物。最终检测的发光强度与样本中待测抗体的含量成正相关。
5. 化学发光免疫反应试剂核心原料之一—磁珠
化学发光免疫分析反应是将化学发光反应与基于磁珠的免疫分析相结合的一种方式，磁珠作为抗体的固相载体，是化学发光试剂中的一个重要的原材料。磁珠可以通过偶联抗体而特异性的结合目标物质，又因其本身具有超顺磁性，因此在外加磁场的作用下，最终达到分离目标产物的作用，简化清洗流程。因此，磁珠的选择对化学发光免疫反应的灵敏度、特异性以及最终的检测结果等具有重要的影响。
为度生物化学发光磁珠具有超顺磁性且磁含量适中，具有优异的重悬性以及较快的磁响应速度；该系列产品采用先进的微球合成技术和独特的表面处理工艺，可修饰多种功能基团，为广大客户开发不同的技术路线提供丰富的选择。高载量的功能基团保障了产品的结合能力，在免疫领域表现优异。