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磁珠法核酸提取得率低,如何解决?
人阅读 发布时间:2020-03-18 13:53
磁珠法核酸提取具备高通量、快速、简单方便、绿色环保无毒等优势,越来越被大部分企业采用。这里给大家整理出核酸提取得率低的一系列原因,以及如何解决。
▼ 裂解不充分
对于提取胞内核酸的应用,我们需要对细胞进行裂解,释放核酸;但是样本类型复杂多变,不同的样本裂解的难易程度具有很大的不同,当裂解不充分时,释放的核酸有限,即使磁珠的吸附能力再强,也很难获得较高的得率。一般可以通过提高胍盐浓度以及表面活性剂浓度,来增强裂解液的裂解能力,胍盐和表面活性剂能够破坏蛋白的高级结构,促进膜蛋白的变性,使得细胞膜破裂。
▼ 结合能力不足结合能力不足有两方面的原因,一是磁珠的选择上,选择的磁珠比表面积过小,功能基团较少,从而吸附核酸能力较弱;二是结合缓冲液结合能力弱。
针对第一种情况,可以选择功能基团较多,比表面积大的磁珠,一般而言粒径越小比表面积越大,但同时磁响应也会偏弱,所以磁珠的选择应根据实际样本情况,如果样本偏粘稠,或者对磁响应要求较高,那么小粒径也很难满足要求,这时我们需要选择粒径适中,并提升缓冲液的结合能力入手。
针对第二点,结合缓冲液一般采用醇类结合,比如乙醇,有些厂家缓冲液是直接使用柱法的试剂转换成磁珠法的,会发现在柱法中表现很好的试剂,在磁珠法中得率很低。这是因为柱法不但其硅胶柱具备结合核酸的能力,还有类似「分子筛」的效果。而磁珠法一般是通过静电吸附、疏水作用来结合核酸,所以对于结合液的结合能力要求会更高,一般可以通过提高醇的比例来增强结合能力,同时,也要提高离液盐(胍盐、钠盐等)的浓度来促进核酸与磁珠的结合。
▼ 洗脱不充分有时候我们裂解结合液各种条件优化到了极致了,可是核酸得率仍然很低。这种情况有可能是磁珠结合了核酸,但是由于洗脱不充分,磁珠结合的核酸没有被洗脱下来。首先,磁珠在晾干过程中可能干燥过度,导致核酸干结在磁珠上不能洗脱下来;第二,洗脱液体积过小导致无法充分洗脱。晾干过程中,需要观察磁珠处于稍微湿润的状态即可,不能完全干燥,这样核酸更容易溶解于洗脱液中。洗脱体积不能太少也不能太多,太少磁珠上的核酸很难洗脱充分,太多会导致浓度偏低。一般来说 0.5mg 的磁珠,洗脱液的体积为 70-100ul。当然,得率的高低除了上述三种情况,还与样本以及个体差异有关,不同的样本核酸含量差异也比较大。对于微量核酸样本,为度生物具备高吸附性能的核酸提取磁珠,具备较高的比表面积的同时磁响应也能适应大部分应用。
苏州为度生物技术有限公司是一家专注于生物技术领域内微球产品规模化生产与应用的高新技术企业,我司已经通过 ISO9001-2015质量体系认证。产品主要有乳胶微球、彩色微球、磁性微球、荧光微球、流式微球、标准微球等全系列微球产品,产品粒径均一可控,多种功能指标可进行定制性调节。我们为客户提供:高质量的纳米级、微米级微球产品;微球产品的个性化定制服务;微球产品的全球 OEM 服务;微球产品的规模化蛋白修饰服务;微球应用中间体的 OEM 服务;微球应用的整体技术解决方案。
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