石蜡切片（FFPE）磁珠法核酸提取过程中的脱蜡方法

福尔马林固定石蜡包埋技术（Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded，FFPE）是一种组织保存技术，长期以来，FFPE 技术在临床检验、细胞形态学检验以及病理学研究中得到广泛应用，近几年来，随着分子诊断的不断发展，FFPE 也越来越多的应用于肿瘤的基因检测。另外，医院的病理科中积存大量的石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究材料来源。
石蜡切片应用于分子诊断过程中，为消除石蜡对 DNA 提取和 PCR 扩增的不良影响，需要在保证不增加外源性 PCR 抑制因子和尽量减少 DNA 额外损伤的前提下对组织进行彻底的脱蜡。目前常用的脱蜡方法有以下两种：

有机溶剂脱蜡法
目前很多比较成熟的试剂盒中的脱蜡方法采用的是有机溶剂脱蜡法，常用的是二甲*苯，由于二甲*苯脱蜡比较彻底，被广泛的应用于肿瘤分子诊断研究中。二甲*苯脱蜡过程中，需要将石蜡包埋组织浸泡在二甲*苯溶液中进行脱蜡，一般常温状态下即可进行脱蜡，但是时间比较长；如果需要提高脱蜡效果，可适当提高二甲*苯脱蜡温度，增加脱蜡的次数。然后采用梯度乙醇进行复水，可以采用 90%，75%，25% 的梯度乙醇进行水化（其他相应梯度亦可），梯度乙醇可以疏松组织结构、促进消化液渗入并去除组织中的痕量二甲*苯和甲醛。待乙醇自然挥发后，将组织浸泡于消化缓冲液，并加入蛋白酶 K，56℃ 孵育进行组织消化。二甲*苯脱蜡是最经典的方法，脱蜡效果比较好，被应用于大多数商业试剂盒，但是二甲*苯是一种有毒的有机试剂，对人体具有一定程度的危害，实验存在风险，同时二甲*苯脱蜡实验过程繁琐，时间至少在3小时以上，时间比较长，另外操作步骤中需要离心，不能适配自动化操作。

加热法脱蜡
加热法脱蜡是一种新的脱蜡方法，简化了石蜡切片脱蜡的实验步骤，实验过程中将裂解液与石蜡切片一起混合，并加入蛋白酶 K，在 60℃和90℃ 各孵育1小时后，使得管内液体分成油层和水层，核酸即存在于水层，通过转移水层即可进行后续的核酸纯化步骤。加热法脱蜡无需采用有毒的有机溶剂，操作步骤简便，脱蜡时间短，目前在FFPE核酸提取试剂盒中应用广泛。加热法脱蜡结合磁珠纯化核酸，可适配自动化设备，实现完全自动化操作。
在 FFPE 磁珠法核酸提取试剂盒开发过程中，以上两种 FFPE 脱蜡方法均可选择，二甲*苯脱蜡比较彻底，但是要注意二甲*苯的残留，对于后续磁珠的结合可能会产生影响，某些磁珠表面壳层为聚合物，二甲*苯残留可能会对磁珠的表面破坏，影响磁珠结合核酸的效率。加热法步骤简便，没有用到对磁珠具有损伤的物质，但是在吸取水层过程中要防止吸到石蜡，导致石蜡残留的风险。

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