微球标记抗体过程中不同的人在实操时总是会遇到千奇百怪的问题，其中最让人愁眉不展的要数微球团聚了，微球清洗之后会发生团聚，活化之后会发生团聚，加入抗体之后还可能发生团聚… …很多人对此都感到毫无头绪，实验真累，我明明是照着说明书在操作的，为什么还会发生团聚呢？今天我们就来简单聊聊微球标记过程中团聚的那些事儿吧。

1、洗涤之后团聚

微球的生产厂家一般都会在保存液中加入一定量的表面活性剂及稳定剂等试剂，而这些组份的存在会对微球标记抗体产生一定的影响，因此在使用之前一般都需要对微球进行清洗，如用 PBS 缓冲液进行清洗。但由于各个厂家的微球合成工艺不尽相同，微球表面的亲疏水性及所带的电荷等存在差异，这样的情况下微球在去除表面活性剂之后，由于表面所带电荷的排斥力不足以维持在体系中的稳定性而发生聚集甚至沉淀的现象。遇到该种情况时使用者可以重新加入少量的表面活性剂（如 0.025% SDS）。另外在微球离心分离后也经常会遇到微球黏壁的现象，出现这种现象时可以从以下两个方面进行解决，第一是加大离心力，第二是使用进口低吸附材质的容器。

2、离心之后团聚

在小体积标记的时候最常见的微球分离方法是离心法，不同粒径大小的微球所需要的离心力不一样，当离心力过大时微球紧贴在离心管底部，相对来说重悬就比较困难；这种情况下需要适当的降低离心转速或减少离心时间使微球尽可能的以一种松散的团状结构形式存在。另外，在重悬微球的过程中可以先用移液器用力吹打微球使之初步重悬后，再采用超声的方式进一步使微球彻底分散（如水浴超声，大功率，建议不低于 500W，时间不低于 2-5min）。

3、活化剂加入后团聚

在微球活化的时候，EDC 等活化剂的加入量多少也会导致微球发生团聚，当加入 EDC 后微球发生团聚首先考虑的是活化剂过量。另外，可以在加入 EDC 之前先加入适量的 Sulfo-NHS，同时在加入 EDC 之后将微球充分混匀也有助于微球的再分散，微球表面基团被 EDC 活化之后形成的是一种不稳定的中间体，而 Sulfo-NHS 的加入使中间体的转化成相对稳定的值，从而避免微球发生团聚。

4、抗体加入后团聚

活化后的微球加入抗体时也会发生团聚的现象，这种情况下我们首先要确定抗体的等电点是否与缓冲液的 pH 值接近，若是，则需要调整缓冲液 pH 值或更换为其他的缓冲体系；反之，等电点与缓冲液 pH 值接近引起的团聚，那么考虑可能是加入的抗体量不足导致的。当加入的抗体量过低时，过量的微球去竞争少量的抗体从而引发微球的团聚，建议适当的增加抗体用量；但是抗体加入之后发生的团聚可能是可逆的，此时只需将微球充分混匀，并用超声的方式将其彻底分散。

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