【案例分享】VDX NTA Ni ultra 寿命验证

长期稳定性，是评价层析填料性能的重要指标。在生物大分子分离与纯化过程中，层析填料的使用寿命直接影响生产成本、工艺稳定性以及产品质量一致性。

填料寿命受到多种因素影响，包括：

Ⅰ 层析柱装填质量

规模化生产中，填料多次循环使用后的性能稳定性至关重要，层析柱装填质量是决定填料使用寿命的关键因素之一。

Ⅱ 样品性质及纯化工艺阶段

通常情况下，捕获和粗纯阶段由于样品杂质含量较高，填料性能衰减速度相对较快；而精纯阶段样品纯度较高，填料可维持更长的使用周期。

Ⅲ 填料再生、清洁及保存策略

合理的CIP（Cleaning-In-Place）流程能够有效去除残留杂质，减少填料性能下降。

VDX NTA Ni ultra  亲和层析介质

VDX NTA Ni ultra以高刚性琼脂糖为基质，通过化学方法偶联次氮基三乙酸(NTA)为配体，螯合镍离子后，形成稳定的八面体结构，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或螯合剂。该产品适用于大规模His-tag蛋白的纯化，可实现His-tag蛋白高纯度，高回收率的纯化。

 

VDX NTA Ni ultra 寿命验证案例

一般来说，如果纯化同一种蛋白，VDX NTA Ni ultra 填料不需要每次使用完进行再生操作，可以重复使用若干次。通常在使用50次后，结合效率有所下降，如图1所示，填料动态载量下降水平约为20%，如载量下降水平无法接受或填料已出现颜色由浅蓝色变成灰褐色或白色的情况时，则表明镍离子已经从柱子中丢失，填料需彻底CIP和再生后才能使用。彻底再生后蛋白载量和纯化和回收率可恢复到原有水平。

1.再生前后50个循环中填料动态载量变化对比

柱子规格：0.8×10 cm

样品蛋白浓度：Protein G（3-4 mg/mL）

平衡液：20 mM磷酸盐、150 mM NaCl、pH 7.5

洗脱液：20 mM磷酸盐、150 mM NaCl、500 mM 咪唑 pH 7.5

BT: breakthrough，穿透;

DBC: dynamic binding capacity，动态载量

Figure 1. Binding of a his-tagged protein by VDX NTA Ni ultra

 

2.再生前后50个循环中填料纯化蛋白回收率变化对比

柱子规格：0.8×10 cm

样品蛋白浓度：Protein G（3-4 mg/mL）

平衡液：20 mM磷酸盐、150 mM NaCl、pH 7.5

洗脱液：20 mM磷酸盐、150 mM NaCl、500 mM 咪唑 pH 7.5

Figure 2. Recovery of a his-tagged protein by VDX NTA Ni ultra

 

若需长时间在位清洗或处理大量填料时，避免影响填料使用性能，建议先将Ni²⁺脱掉（可参照说明书中再生步骤），再进行在位清洗步骤，清洗完成后再挂Ni²⁺保存。

 

VDX NTA Ni ultra 产品信息

VDX NTA Ni ultra通过特殊的表面修饰，大大地提升了Ni原子与His标签的结合灵活性，从而实现了更高的蛋白载量和回收率。

 

产品优势

更强的结合能力：能够成功结合传统镍填料无法结合的标签蛋白

更高的结合载量：在相同条件下，其结合载量显著高于传统镍填料

更优的纯化效果：不仅提高了自标蛋白的纯度和收率，还减少了杂质残留

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