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为度链霉亲和素磁珠助力生物素化分子的高效分离纯化
人阅读 发布时间:2023-08-23 15:43
链霉亲和素磁珠与靶标结合的方式
根据捕获的目标分子和下游应用的不同,可以选择直接法或间接法捕获目标分子。直接法是将生物素化的配体固定于磁性微球上,再将有配体的磁性微球与样本进行孵育,最后通过磁分离即实现靶标的捕获,通常适用于靶标的快速检测。间接法是生物素化配体先与样品中的目标分子结合形成复合物,再将此复合物与链霉亲和素磁性微球共孵育,磁分离后即实现靶标分子的捕获。间接法适用于靶点浓度较低、特异的亲和力较弱或结合动力学较慢的实验中,如NGS靶向捕获测序应用。
链霉亲和素磁性微球使用方案
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DNA 结合试剂:D-Binding Buffer: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM EDTA, 2 M NaCl;D-Washing Buffer: 5 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.5 mM EDTA, 1 M NaCl
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RNA 结合试剂:以下试剂应均用 Nuclease-free ddH2O 配制:R-Binding Buffer: 0.1 M NaCl;R-Washing Buffer: 0.1 M NaOH, 0.05 M NaCl
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蛋白结合试剂:PBST Buffer: PBS (pH 7.4), 0.05% Tween 20;PBS/BSA Buffer: PBS (pH 7.4), 0.01% - 0.1% BSA
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核酸释放试剂:95% 甲酰胺溶液 (95% 甲酰胺 + 5% 10 mM EDTA (pH 8.2))
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蛋白释放试剂:0.1% SDS
1. 将磁性微球平衡至室温后,置于涡旋振荡仪上30 s充分混匀,用移液器吸取磁性微球至EP管中,置于磁力架上,溶液澄清后(约1min)吸弃上清。
2. 将EP管从磁力架上取出,加入初始磁性微球量2倍体积的D-Washing Buffer(DNA捕获)或R-Washing Buffer(RNA捕获)PBST Buffer(蛋白捕获),置于涡旋振荡仪上重悬10 s。
3. 短暂离心后,将EP管置于磁力架上,溶液澄清后吸弃上清。
4. DNA捕获与蛋白捕获重复步骤2,3两次,RNA捕获重复步骤2,3一次。
DNA 捕获
1. 向预处理后的磁性微球 (弃尽上清) 中加入 2 倍原始磁性微球体积的 D-Binding Buffer,再加入和 D-Binding Buffer 等体积的生物素化 DNA 样本,充分混匀后,室温下置于垂直旋转混匀仪中孵育 15 - 30 min,短暂离心后,将 EP 管置于磁力架上,溶液澄清后吸弃上清。
注:混匀的转速不可过高,建议 20 - 30 rpm。
2. 加入 2 倍样本体积的 D-Washing Buffer 于 EP 管中,用移液器吹打 10 次充分混匀。短暂离心后,将 EP 管置于磁力架上,溶液澄清后吸弃上清。
3. 重复步骤 2 一次。
4. 根据后续实验的要求,加入合适的缓冲液重悬磁珠,磁珠可用于后续操作。
2. 加入 2 倍原始磁性微球体积的 R-Binding Buffer,再加入与 R-Binding Buffer 等体积的生物素化 RNA 样本,充分混匀后,室温下置于垂直旋转混匀仪中旋转 15 - 30 min,短暂离心后,将 EP 管置于磁力架上,溶液澄清后吸弃上清。
3. 加入 2 倍样品溶液体积的 R-Binding Buffer 溶液于 EP 管中,用移液器吹打 10 次混匀,短暂离心后置于磁力架上,溶液澄清后吸弃上清。
4. 重复步骤 3 一次。
5. 根据后续实验的要求,加入合适的缓冲液重悬磁珠,磁珠可用于后续操作。
2. 加入 2 倍原始磁性微球体积的 PBST Buffer 或 PBS/BSA Buffer 于 EP 管中,用移液器吹打 10 次充分混匀,短暂离心后,将 EP 管置于磁力架上,溶液澄清后吸弃上清。
3. 重复步骤 2 一次。
4. 根据后续实验的要求,加入 PBST Buffer 或 PBS/BSA Buffer 或其他合适的缓冲液,重悬磁珠。磁珠可用于后续操作。
生物素修饰的核酸/蛋白释放
1. 核酸与链霉亲和素磁性微球分离:加入95%甲酰胺溶液后,65℃加热5 min或90℃加热2 min,释放核酸。
2. 蛋白与链霉亲和素磁性微球分离:加入0.1% SDS溶液后,煮沸5 min使蛋白分离。
为度链霉亲和素磁珠对生物素化配体的结合能力
为度生物可提供靶向捕获链霉亲和素磁珠,可与生物素化单链寡核苷酸、DNA 和抗体等生物素化配体结合,同时可提供不同的粒径选择,以匹配广泛的应用方向,为您的靶向捕获实验加速提效。
产品优势:
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磁珠粒径小(600nm-3μm),比表面积大,磁珠表面链霉亲和素含量更高,结合生物素化配体的能力更强,有效提升磁性微球的捕获效率。
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粒径多样,可根据应用需求选择。
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磁响应速度快,可避免因磁吸不完全而造成目标分子捕获不充分的情况。
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微球粒径均一,粒径分布系数(CV)在 5% 以内,保证了下游实验重现性好。
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具有超顺磁性,在溶液中重悬性能优异。
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